偶氮染料是一大類含偶氮基團 -N=N-的合成有機染料，常用于著色紡織品和皮革，但某些偶氮染料釋放有致癌風(fēng)險的芳香胺。因此，歐盟（EU）嚴格控制對這些有害胺類的暴露水平。歐盟法規(guī) 14362 [1, 2] 禁止使用釋放 表 1 所列22種芳香胺類的偶氮染料，禁止將其用于與人體皮膚或口腔有直接或長期接觸的紡織品和皮革制品中。

表 1. 分析用偶氮染料（化合物1、4、13和14未受歐盟法規(guī)控制） （放大圖片）

時間 （min）	% B
0	14
4.5	29
8	29
9	50
10.5	65
12	90
14	100
15	14

表 2. 26種偶氮標準品的改良梯度分離

分析速度比推薦方法快80%

我們用 安捷倫Poroshell 120 EC-C18，3.0 x 150 mm，2.7 µm色譜柱和安捷倫1290 Infinity液相色譜儀，分析了26種芳香胺——包括EU禁止的22種。對EN 14362中的方法進行梯度改良，提高了在該柱上的分離度 （表 2）。標準品混合物用甲醇和流動相A（10:90）溶解，配制成濃度為12 µg/mL，于40 °C下避光保存。

EU方法采用4.6 x 250 mm，5 µm 色譜柱進行分析，梯度洗脫70分鐘[ [1] ，但我們使用了Poroshell 120 EC-C18，3.0 × 150 mm，2.7 μm 色譜柱，為這些芳香胺類化合物提供了良好的選擇性和峰形。2.7 µm表面多孔填料提供了與亞2 µm全多孔填料相近的性能，150 mm 色譜柱提供了非常高的峰容量。這類復(fù)雜混合物樣品需要高峰容量，才能在短分析時間內(nèi)得到更好的分離度。在這一混合物中，4, 4'-亞甲基雙苯胺 （11）、6-甲氧基-間-甲苯胺（12）、 2,6-二甲基苯胺（13）、 2,4-二甲基苯胺（14）, 3,3'-二甲氧基對二氨基聯(lián)苯 （15）和 3,3'-二甲基對二氨基聯(lián)苯（16）很難分離，因為它們對梯度的略微變化非常敏感。現(xiàn)在我們通過改良梯度，在15分鐘內(nèi)分離了所有26種化合物 （圖 1），比推薦方法幾乎快80%。3.0 mm較小內(nèi)徑色譜柱比4.6 mm 內(nèi)徑色譜柱節(jié)省溶劑約60%左右。

圖 1. 26種偶氮標準品在安捷倫Poroshell 120 EC-C18柱上得到了良好分離 （放大圖片）

圖 2. 在不同UV波長下偶氮染料的色譜圖（上圖240 nm、中圖280 nm、下圖305 nm ） （放大圖片）

圖 3. 2個不同批次流動相在2天中6次進樣于240 nm處的色譜圖顯示出出色的重現(xiàn)性 （放大圖片）

許多偶氮染料都有自己的zui大UV吸收，所以用多波長，包括240 nm、280 nm 和305 nm進行檢測，每個峰都得到*信號 （圖 2）。

耐用的色譜柱獲得更高分離度和出色重現(xiàn)性

2.7 µm表面多孔填料的性能與1.8 µm填料相似，但反壓低40%。即使使用150 mm色譜柱，zui大反壓也只有580 bar，所以，該方法仍可以在600 bar壓力限的UHPLC柱上運行。

較長的Poroshell 120 EC-C18色譜柱，與 安捷倫1290 Infinity液相色譜系統(tǒng)匹配，將在獲得更高分離度、更快速度和更可靠結(jié)果方面為您提供更大的靈活性。 圖 3 中的疊加色譜圖表明，該方法具有良好的重現(xiàn)性。這些圖譜包括用2個不同批次流動相在2天中得到的色譜圖。

獲得可靠結(jié)果僅需15分鐘

用新的Poroshell 120 EC-C18表面多孔填料柱，在15分鐘內(nèi)基線分離了26種偶氮染料。該方法提供了出色的重現(xiàn)性和可靠的結(jié)果，分析時間縮短了近80%，溶劑用量減少了60%。

如需進一步了解 Poroshell 120 色譜柱的多種優(yōu)點，可下載應(yīng)用報告 5990-7705EN 以了解此次分析的詳細資料。

參考文獻